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WU 多瘤病毒 (WU polyomavirus, WUPyV) 由Gaynor 等[1]于 2007 年 5 月, 通过分子病毒筛查方法, 从急性呼吸道感染患儿的鼻咽部抽取物中发现。 WUPyV 感染的主要临床表现是咳嗽、 喘息等呼吸道感染症状。 因 WUPyV 与其他病毒合并感染率高, 所以至今对其在人类疾病中的致病意义仍有争议[1-8]。 呼吸道合胞病毒(RSV) 历来被认为是典型的儿科呼吸道感染病毒。 本研究通过多重 PCR技术, 检测呼吸道感染患儿咽拭子中的 WUPyV、RSV、 人博卡病毒(HBoV) 等 10 种(型) 病毒, 并重点比较 WUPyV 和 RSV 感染患儿的临床特征, 以探讨 WUPyV 感染在儿科呼吸道感染中的临床意义。
    1 资料与方法
    1.1 一般资料
    选取汕头大学医学院第二附属医院儿科 2008年 1 月至 2010 年 9 月因呼吸道感染住院患儿, 共1 701 例 。 其 中 男 901 例 ( 52.3% ) ; 女 800 例(47%); 男女比例为 1.3 ∶ 1。 年龄分组: < 6 个月512 例(30.0%), ~ 1 岁 374 例(22.0%), ~ 3 岁 493例(25.3%), ~ 5 岁 204 例(12.0%), > 5 岁 118 例(6.9%)。 本研究获得医院伦理委员会同意 , 入选患儿均由患儿家属签字同意。
    1.2 方法
    1.2.1 标本收集 患儿入院 2 h 内用无菌的聚酯纤维塑料柄拭子采集双侧后咽和扁桃体部位分泌物,采集后立即将咽拭子装入含有 2 ml 病毒运输培养液的无菌小瓶中, 置-80℃冰箱中待检。
    1.2.2 标 本 处 理 病 毒 DNA / RNA 提 取 试 剂 盒(Axyprep Body Fluid Viral DNA / RNA Miniprep Kit)购于美国 Axygen 公司, 严格按照说明书操作, 提取所得的 DNA/RNA -80℃冰箱保存备用。 应用PCR 技术进行 WUPyV、 RSV、 腺病毒 (ADV)、 鼻病毒(RHV)、 流感病毒 A 型(IVA)、 流感病毒 B 型(IVB)、 副流感病毒 1 型(PIV1)、 副流感病毒 3 型(PIV3)、 偏肺病毒 (HMPV) 等常见呼吸道病毒检测。 引物设计参照文献[9]。 引物由上海生工生物公司合成, 引物序列见表 1。应 用 美 国 Fermentas 公 司 生 产 的 2 × PCRMaster Mix 进行常规 PCR 扩增 , 检测 DNA 病毒 ;应用德国 QiaGen 公司生产的 One step RT-PCR Kit进行 RT-PCR 扩增, 检测 RNA 病毒。 扩增条件分别为: ① 多重 PCR: 94℃, 5 min; 94℃, 30 s;50℃, 30 s; 72℃, 1 min; 40 个循环; 72℃, 10 min。② 多重 RT-PCR: 50℃, 30 min; 95℃, 15 min;94℃ , 45 s; 55℃ , 1 min; 72℃ , 45 s; 40 个循环; 72℃, 10 min。 扩增产物以 10 g/L 琼脂糖凝胶电泳, 最后在紫外线透照灯下观察结果。
    1.2.3 临床资料收集 收集 WUPyV 和 RSV 感染患儿的年龄、 性别、 症状、 体征、 白细胞计数(WBC)、 急性 C 反应蛋白 (CRP) 值、 胸片等临床资料。
    1.3 统计学分析应用 SPSS13.0 统计软件进行数据处理和分析。正态分布计量资料采用两独立样本 t 检验; 如非正态分布计量资料则采用非参数 U 检验。 各组间率的比较采用 χ2检验。 P < 0.05 为差异有统计学意义。
   

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