精品学习网为大家整理的外科论文：可卡因诱导大鼠肝细胞凋亡的探究，供大家阅读参考。

药物由肝脏代谢，我们通过原位缺口末端标记和流式细胞仪测定，进一步研究可卡因对鼠的肝脏损害。　　

1 材料与方法　　

1.1 动物分组 Wistar大鼠，鼠龄35天，共60只。置于室温(20±2)℃的清洁级动物室中，自由进食饮水，适应5～7天后，将其随机分成两组:实验组和对照组。从40天开始，在实验组所有大鼠腹腔内注射溶解于0.5ml蒸馏水的盐酸可卡因(60mg/kg)。对照组每天给腹腔内注射0.5ml普通生理盐水。用药后24h、96h和7天相继处死，获取肝脏。

1.2 原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡 各组所取组织用10%中性缓冲福尔马林固定，常规石蜡切片。原位细胞凋亡检测试剂盒(POD)购自德国Bockinger Mannheim公司，蛋白酶K为Sigma公司的产品，按试剂盒说明进行检测。结果判定标准:凋亡细胞着色呈棕黄色颗粒状，位于细胞核内。光 学显微镜观察任意10个视野(400倍)并计算凋亡率。　　

1.3 流式细胞仪测定 分别取实验组和对照组肝脏组织。制成细胞悬液，于4℃离心1500r/min，5min。弃上清，加入溶红细胞液(7g/L氯化铵，2.6g/L Tris-HCl)1ml，4℃离心1500r/min，5min。弃上清，加入冷70%(体积分数)乙醇200μl，复悬，于4℃过夜。4℃离心1500r/min，5min。弃上清，用0.1mol/LPBS(无钙镁离子)洗涤1次，加入RNaseA(20g/L)，于37℃孵育30min，室温离心1500r/min，5min。弃上清，用PBS复悬，加PI液50μl混合，于室温暗处放置，30min内测定。使用COULTER EPICS(r)-XL型流式细胞仪。光源为氩离子激发器，功率15mV，激发光波长为488nm，测定10000个细胞，细胞荧光信号被送入脉冲高度分析仪，并在荧光屏上显示，同时将测定数据输入PHOENIX FLOW SYSˉTEMS MULTICCLE VERSION4.0进行数据分析。　　

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