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实验部分

1外源性PCr对小鼠全脑永久性缺血损伤的影响

(1)动物分组、给药及模型制备:小鼠60只，随机分为对照组、PCr高剂量组(4.5g•kg-1)、PCr低剂量组(1.5g•kg-1)，每组20只。腹腔注射给药，容量0.1mL•10g-1体重，对照组给予等容量NS。于给药20min后用大组织剪沿小鼠双耳连线下部快速断头，制备全脑永久性缺血模型。

(2)标本处理及指标测定:每组取10只于断头即刻记录张口喘息持续时间。另10只于动物断头20s取大脑，一侧半球制备10%脑组织匀浆，严格按照试剂盒说明书测定蛋白浓度(考马斯亮蓝法)、SOD活力(黄嘌呤氧化酶法)及MDA含量(TBA法)。另侧脑半球经10%福尔马林固定，常规制备石蜡片HE染色。

2外源性PCr对小鼠全脑缺血再灌注损伤的影响

(1)实验分组、给药及模型制备:小鼠50只，随机分为假手术组、模型组、PCr高剂量组(2.0g•kg-1)、低剂量组(1.0g•kg-1)组及尼莫地平(Nim)组，每组10只。NS及PGr分别以0.1mL•10g-1体重于首次缺血即刻1次尾静脉注射，Nim组术前2d始灌胃给药，2次/d，每次100mg•kg-1体重，手术当天术前30min末次给药。按文献[2]方法，小鼠麻醉，双侧颈总动脉(CCA)完全阻断血流10min，复灌10min，重复3次，制备全脑缺血再灌注损伤模型。假手术组仅暴露CCA，不进行缺血再灌操作。不同处理组小鼠分别于末次再灌2h后断头取脑。

(2)标本处理及指标测定:每组取10只小鼠左侧大脑测定脑组织含水量(干湿重法)脑含水量(%)=(湿重-干重)/湿重×100WesternBlot法测定CD14蛋白表达:每组取6只小鼠右侧大脑组织经裂解液充分裂解后，4℃离心取上清，BCA试剂盒测定蛋白浓度。12%SDS-PAGE分离胶，5%SDS-PAGE浓缩胶。样品经处理后上样，电泳、PVDF膜转膜(恒流0.8mA/cm，室温，48min)，5%脱脂奶粉封闭。Rabbitanti-RatCD14(1∶250)以及β-Actin抗体(1∶1000)孵育过夜(4℃)，二抗(1∶5000)37℃水浴孵育2h。ECL暗室显色，凝胶成像系统拍照后Gel-ProAnalyzer4.0软件分析。

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