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检测指标及方法

1神经功能缺失评分

实验前先对大鼠进行训练，采用神经损伤评分[4](NSS)。术后第1天，NSS8～12分的大鼠进入本实验。术后第1、3、7天，对3组大鼠进行评分及方差分析。

2脑梗死体积测定

将大脑由额极至枕极分为5枚脑片，2mm/片，立即置于2%TTC(红四氮唑)溶液中，37℃水浴30min，4%多聚甲醛固定30min。显微图像分析系统采集每片脑切片上、下面图像，分析每片脑切片上、下面脑梗死面积。根据梯形法则计算脑梗死体积。

3免疫组化染色

梗死后3d，将大鼠用10%水合氯醛麻醉，4%多聚甲醛心内灌注后取脑，固定24h，组织脱水包埋。在梗死灶中心部位，相当于以前囟为中心，冠状面+1～-1mm，每隔100μm，连续7μm切片5张，对NGF进行免疫组化染色。一抗为兔抗NGF(1∶200)，二抗为生物素化羊抗兔IgG。显色底物为DAB显色剂。

4NGF测定

将染色后的脑组织切片取梗死周围皮质，进行显微图像采集、分析(MetaMorph/DP10/BX41)，记录经过处理软件包量化后的灰度值。

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